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取样方法集锦 | 皮肤、生殖道、肺泡灌洗液,一文搞定!
发布时间:2017-08-25 18:16   点击率:
皮肤取样
1. 无菌棉拭子用酶裂解液浸润(20mM Tris pH8, 2mM EDTA和1.2%Triton X-100),在待测部位,以一定的力度,来回摩擦50次(持续时间大概30S),面积约4cm2
2. 将棉拭子头部剪下,置于冻存管中。
3. -80℃保存,干冰寄送。

参考文献:
Grice EA, Kong HH, Conlan S, Deming CB, Davis J, Young AC; NISC Comparative Sequencing Program, Bouffard GG, Blakesley RW, Murray PR, Green ED, Turner ML, Segre JA. Topographical and temporal diversity of the human skin microbiome. Science. 2009 May 29;324(5931):1190-2.

浅表层皮肤取样
1. 用无菌一次性刀片对皮肤进行刮擦,面积约4cm2
2. 用浸泡在酶裂解液(20mM Tris pH8,2mM EDTA和1.2%Triton X-100)的棉拭子(CTA)将皮肤碎屑 从刀片上刮下,然后将沾取了皮肤碎屑的棉拭子头部剪下,置于无菌冻存管。
3. -80℃保存,干冰运输。

参考文献:
Grice EA, Kong HH, Conlan S, Deming CB, Davis J, Young AC; NISC Comparative Sequencing Program, Bouffard GG, Blakesley RW, Murray PR, Green ED, Turner ML, Segre JA. Topographical and temporal diversity of the human skin microbiome. Science. 2009 May 29;324(5931):1190-2.

生殖道取样
方法一(含保护液)
1. 采用无菌棉拭子,沿着阴道口、阴道中部和后穹窿内腔壁旋转拭子做圆周运动5次。
2. 擦拭后立即将拭子浸入收集管中的保存液中,拭子按压管壁多次20秒,以确保细菌从拭子转移到溶液中。
3. 样品置于-80℃保存,干冰寄送给公司。

采用Copan Liquid Amies Elution Swab (ESwab) Collection and Transport System进行取样(Catalog No. 480C)

使用步骤:    
① 拆开包装。
② 取出收集管和棉拭子,用棉拭子进行取样。
③ 将棉拭子放入含有保存液的收集管,拭子按压管壁多次20秒,以确保细菌从拭子转移到溶液中。
④ 从中部折点处将棉拭子折断。
⑤ 盖上螺旋帽,使棉拭子的棒端刚好卡在螺旋帽上。
(注:步骤4-5,可根据实验要求进行选择性保留)

参考文献:
1.Shen J, Song N, Williams CJ, Brown CJ, Yan Z, Xu C, Forney LJ. Erratum:Effects of low dose estrogen therapy on the vaginal microbiomes of women with atrophic vaginitis. Sci Rep. 2016 Nov 29;6:34119
2.HMP取样方法

方法二(不含保护液)
1. 用灭菌棉拭子从从阴道后穹隆、中间点、入口处取样。
2. 棉拭子(可用无菌生理盐水湿润)沿壁擦拭3-5次后, 将棉拭子从中部折断,含有棉拭子头部的部分置于收集管中。
3. 样品-80℃保存,干冰寄送。

参考文献:Stout MJ, Zhou Y, Wylie KM, Tarr PI, Macones GA, Tuuli MG. Early pregnancy vaginal microbiome trends and preterm birth. Am J Obstet Gynecol. 2017 May 23. pii: S0002-9378(17)30641-5.

肺泡灌洗液取样
1. 口咽部进行雾化利多卡因麻醉后,支气管镜通过口或鼻经过咽部进入肺部。
2. 滴注120-300mL无菌等渗盐水进行BAL液体标本的收集。取样后储存在冰上,4℃离心13000rpm(22,500g)30分钟,去掉上清,取沉淀物。
3. 储存在-80℃,干冰寄送。

参考文献:
Dickson RP, Erb-Downward JR, Prescott HC, Martinez FJ, Curtis JL, Lama VN,Huffnagle GB. Analysis of culture-dependent versus culture-independent techniques for identification of bacteria in clinically obtained bronchoalveolar lavage fluid. J Clin Microbiol. 2014 Oct;52(10):3605-13.